)红色毛癣菌
红色毛癣菌[1] 域：真核域(Eukaryota)
[2] 界： 真菌界(Fungi)
[3] 门： 子囊菌门(Ascomycota)
[4] 亚门： 盘菌亚门(Pezizomycotina)
[5] 纲： (Eurotiomycetes)
[6] 目：散囊菌目(Onygenales)
[7] 科： 裸囊菌科(Arthrodermataceae)
[8] 属： 毛癣菌属(Trichophyton)
[9] 种： 红色毛癣菌(T. rubrum)
[10] 学名 Trichophyton rubrum
生理生化等方法，但红色毛癣菌的菌落产红现象受培养基类型、pH、培养温度等因素的影响[1]，我们应用PCR方法，以微小卫星DNA引物，对这2种癣菌的基因组DNA进行扩增，可以在很短时间内把它们区分开来。
[1] 实验菌株：本研究采用红色毛癣菌临床分离株23株。红色毛癣菌中11株来自上海地区，3株来自徐州地区，8株来自重庆地区，1株来自广州地区，表型中羊毛型、绒毛型16株，粉末、沟纹型6株，颗粒型1株；所有菌株均经上海长征医院真菌室作形态学及马铃薯葡萄糖琼脂培养基、尿素琼脂培养基鉴定。
[2] 主要试剂：DNA抽提缓冲液按文献配制[2]，氯化苄为上海试剂三厂产品，TaqDNA聚合酶、PCR反应缓冲液、dNTPs为日本Takara公司产品。
[3] DNA制备：实验菌株于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平皿上28℃培养2周，无菌牙签刮取菌丝体，采用氯化苄法提取基因组DNA[2]。
[4] PCR扩增：以寡核苷酸重复序列(GACA)4、(GTG)5及M13中心序列(5′－GAGGGTGGCGGTTCT－3′)等3种引物，对抽提的基因组DNA进行扩增。PCR反应体积20μL,其中包括：2μL10×PCR反应缓冲液(其中含Mg2mmol/L)，1μLdNTPs(2.5mmol/L),2μL引物(10μmol/L),1μLDNA模板(50ng/μL)，1UrTaqDNA聚合酶(5U/μL)。反应条件：①(GACA)4：起始变性94℃5min；94℃1min，退火47℃1min，延伸72℃1min，38个循环；72℃延伸5min。②M13中心序列及(GTG)5：起始变性94℃5min；94℃1min，退火50℃1min，延伸72℃80s，35个循环；72℃延伸6min。产物于1.2％琼脂糖凝胶电泳3V/cm，1.5h，紫外灯下照相记录。
在电泳凝胶上，可观察到3种引物扩增下红色毛癣菌呈现不同的带型。在(GACA)4作引物时，红色毛癣菌的主要扩增条带有3条，大小约1100bp、950bp、600bp左右，特征主条带为950bp、1050bp2条。特征条带的差距相当明显、直观。
［1］刘维达，王金燕，吕桂霞，等.红色毛癣菌菌落产色变异的实验研究.中华皮肤科杂志，1997，30：312－314.
[2] 安全文化网 http://www.anquan.com.cn/
[3] 武汉凯博网 http://www.1747.com.cn/
[4] 小木虫学术研究第一站 http://emuch.net/
[5] 阿拉丁试剂网 http://www.aladdin-reagent.com/
[6] 中国知网 http://www.cnki.com.cn/
[7] 生命经纬 http://www.biox.cn/
