杂交鲍鱼
杂交鲍鱼,与皱纹盘鲍无大差异,其外壳呈翠绿色,皱纹突起明显,呼吸孔多,生长纹明显。杂交鲍有效的提高了子代的抗逆性。成活率提高6-7倍,生长周期缩短了一年,越冬成活率提高到90%,生长速度提高30%,摄食量提高了70%。在5000m2水面中,出苗量5000头/ m2 ,成活率达90%以上。分布于中国北部沿海,山东、辽宁产量较多,其中山东的威海、长岛,辽宁的金县、长山岛产量最多。产季多在夏秋季节。鲍肉肥美,为海产中的珍品,多供应高级宾馆和出口。除鲜食外,亦可加工成罐头或鲍鱼干,售价均昂贵。鲍贝壳即有名的中药石决明,又是制作贝雕画的重要材料。
由中国科学院海洋研究所张国范课题组主持研究的“大连1号”杂交鲍由全国水产原种和良种审定委员会审定为国家级新品种。国家农业部为该品种颁发了新品种证书,认定其为适宜推广的杂交新品种,可在人工可控的水体中养殖。“大连1号”杂交鲍是我所培育的第一个国家级动物新品种,也是我国第一个通过审定的海水贝类新品种。
“大连1号”杂交鲍鱼是利用皱纹盘鲍日本岩手群体和大连群体杂交形成的杂交种。该杂交种杂种优势明显,性状稳定,具有适应性广、成活率高、抗逆性强、生长快、品质好等特点。与父母本比较,生长速度平均提高20%以上,成活率提高1.8 - 2.3倍,适宜水文0-29℃。与非杂交鲍鱼相比较适温上限提高了4-5℃,使杂交鲍养殖区海域从渤海和黄海北部向福建和广东北部海域扩展,养殖区域进一步扩大,经济效益将更加显著。
目前皱纹盘鲍养殖生产中出现很多问题,突出表现为种质严重退化,养成周期长,成活率低,抗病力差,尤其是近几年稚鲍病毒性和细菌性疾病大面积蔓延,造成稚鲍大批死亡,严重影响了鲍养殖生产的持续发展。分析原因,主要是过去人工育苗所采用的种鲍往往来自同一海区,经多年繁衍,其亲缘关系越来越近,产生近交衰退,造成种质严重退化。因此,要使鲍养殖业得到稳步发展,就要搞好种质的优化复壮。而利用杂交技术进行种质改良,培育出性状稳定、生长快、抗病力强的鲍是这一产业的关键所在。利用日本盘鲍(haliotis)与本地皱纹盘鲍(H.discus hannai)进行杂交育种技术研究取得了较好效果。研究情况总结如下:
1材料与方法
1.1材料
1.1.1亲鲍来源
1999年1月下旬从大连长海县购进皱纹盘鲍亲鲍1000头,规格8cm以上,其中雌鲍450头,雄鲍550头。1999年2月13日从大连市水产研究所购入日本盘鲍亲的50头,规格10cm以上,其中雌鲍22头,雄鲍28头.2000年1月20日从青岛购进皱纹盘鲍1500头规格8cm以上,其中雌鲍980头,雄鲍520头。2000年1月15日从日本青森县购进日本盘鲍亲的120头,规格8.5cm,其中雌鲍58头,雄鲍62头。
1.1.2饵料
幼体培育用底栖硅藻和人工配合饵料,海上养成用鲜海带、裙带莱等。
1.1.3试验设备
刺激鲍产卵排精用的30w石英 紫外线灯管、水槽及采苗板。稚鲍中间培育用的网箱、黑色波纹板。养成用的海上筏架、养鲍笼等。
1.2方法
1.1.2饵料培育
先将培育池、采苗板洗刷干净消毒,于前1年的11月份接种底栖硅藻,并逐步扩大培养,到第2年4月初扩大接种结束。每日换水2—3次,每次1/2~/3,水温保持10~15℃,定期施肥(结合换水进行),氮、磷比为10∶1,适量补施铁、硅肥等。为防止大型硅藻繁生,光照调在2500~3000lx范围内。定期倒转采苗板方向,以促进饵科均匀繁殖生长。当采苗板上出现挠足类繁殖,在培养池中加1~2×10-6的敌百虫捕杀干净。
1.1.2亲鲍贮养促熟
亲鲍自2月初入池促熟,培育密度30—50个/m3,亲鲍入池后每天升温1~1.5℃,升至20℃恒温促熟,待产。每天全量换水1次,换水温差不超过0.5℃,后期不超过0.3℃,并结合清除污物,粪便观察性腺发育情况。每天上午换水结束后投入新饵料,以新鲜海带为主,每天投喂量一般按亲鲍体重的30%,同时结合水温及摄食情况随时加以调整。为了改善水质,增加溶解氧,形成水流,有利于性腺的发育,促熟期间需要全天连续充气,充气量不少于1m3/小时。鲍具有背光性,暗光或黑暗状态对亲鲍的摄食、活动有利,故一般光照控制在100lx以下。要保持室温恒定,当有效积温达到300~400℃时,挑出雌、雄鲍,分别促熟暂养,每天做好有效积温和摄食记录。
1.2.3采卵、受精、孵化
1999年4月12日,贮养的皱纹盘鲍在有效积温达800℃时自然产卵,日本盘鲍在有效积温达到1250℃时,经人工刺激后排精。5月3日通过人工刺激,促使皱纹盘鲍和日本盘鲍分别产卵、排精,进行正向杂交。5月15日和6月2日亦以刺激法诱导日本盘鲍和皱纹盘鲍产卵、排精,进行反向杂交。将采集的卵子集中定量,待卵下沉后排掉上层清水,然后按每个卵子10000个左右精于加入受精,边加精边搅动海水,半分钟受精结束,用新鲜过滤海水洗卵数次,以除去多余精子。然后,将受精卵移入孵化池,放卵密度为20~30个/ml,在胚体上浮前每6~8小时换水1次,每次3/4,水温保持18~20℃。
1.2.4采苗、稚鲍前期培育
将后期面盘幼体每筐架投放1万~l.5万个,3天后附着结束,附苗率为30%左右,平均每张采苗板附着量为200~300个。稚鲍前期培育确保水质优良,每天换水3次,每次的交换量为培育水体的8倍以上,前期水流要缓,待全部附着后适当增加流量。水温为18~20℃。为使底栖硅藻不断增殖,以保证幼鲍饵料供应,每天清晨结合换水施以氮1×10-6、磷0.1×10-6。光照控制在1500~3000lx。
1.2.5稚鲍后期培育
附苗后35天左右,稚鲍规格达2~3mm时,逐步剥离并转移到网箱培育。剥离方法用2%的酒精海水麻醉法。剥离后,1天24小时常流水,流水量为10个量程以上。投人工配合饵料,每天傍晚前投喂1次,投喂量根据稚鲍摄食情况随时调整。每天清晨坚持清污,除去残饵和死苗,定期倒池,洗刷网箱。稚鲍人箱后约2个月以上,平均壳长9mm左右,由于个体间出现较大差异,此时进行剥离筛选分级,选用2级网目的筛网,1次分离出3种体长规格,将大、中、小个体分开单独饲养。
1.2.6鲍的中间育成
当年11月份水温6~8℃,剥离筛选壳长<1cm、壳长1~1.5cm和1.5~2cm、2~2.5cm以及3cm以上5种规格,进行室内水泥池越冬中间育成。中间育成密度与鲍苗大小有关:壳长<1cm,中间育成密度3000~4000个/m2;壳长1~1.5cm,密度2000~2500个/m2;壳长1.5~2cm,密度为1000~1500个/m2;壳长2~2.5cm,密度为750~1000个/m2;2.5cm以上500~750个/m2。鲍苗入池后,每天升温1℃,升到7.8℃恒温流水培育,海水预热后循环使用,循环量每天8倍以上。每天下午4:00~5:00投饵,海带的投喂量为鲍体重的10%~20%。要根据水温变化及幼鲍状态随时调节投喂量,避免投喂过多,浪费饵料,影响水质。发现鲍不上板,并出现死亡时,马上更换波纹板和网箱。换下的器材和工具用50×10-6的高锰酸钾消毒,消毒后在日光下曝晒2~3天后使用。发现鲍苗有病时,投喂药饵或进行药浴:药饵采用土霉素等药品,将药品溶解后混入饵料中投喂,2~3天为1疗程;药浴用四环素、链霉素等,一般5×10-6左右,药浴时间至少6小时,药浴时充气。
2.结果
2.11999年培育杂交鲍苗情况
从附着到剥离(2~3mm)成活率40%。剥离后再培育,当鲍苗规格达1cm以上时,再剥离,筛选分级,成活率达60%。经多次筛选分级培育,共育1cm以上杂交鲍苗600万粒,单位水体出苗4286粒。1999年的试验证明了将本地皱纹盘鲍与日本盘鲍进行杂交,能够培育出具有杂种优势的子一代鲍苗,其性状明显优于皱纹盘鲍自交培育的鲍苗,且杂交组合中以正交皱(♀)x日(♂)组合最好。
2.2 2000年培育杂交鲍苗情况
从附着到剥离(2~3mm)成活率达45%。剥离后再培育,当鲍苗规格达1.0cm以上时,再剥离,筛选分级,成活率达65%,从7月中旬开始底播增殖小规格苗200余万粒,育出1cm以上商品鲍苗6加万粒。
杂交组与自交组受精率与孵化率基本相同,而附苗率与附苗后的成活率相差较大,其中正交皱(♀)×日(♂)较反交皱(♂)×日(♀)的杂交效果要好。从附着到2~3mm剥离,杂交组体现出附苗率和成活率高的明显优势。
2.4 剥离后成活率及越冬中间培育成活率比较
至1999年8月中旬,鲍苗长到1.5cm以上开始剥离筛选。
杂交苗仅10个池,筛选计数49.47万粒,成活率高达66.94%,其中1cm以上占45.79%。而自交组经第1次剥离,进入中问培育28万粒苗,到第2次剥离筛选只剩下1.74万粒,成活率仅为6.21%,规格达1cm以上,仅占13.79%。从越冬后成活率看,杂交苗成活率达95%,而自交为70%,相差25%。
2.5 杂交组与自交组生长速度比较
从孵化至7月中旬,杂交组与自交组生长速度差别不明显。从7月中旬至越冬中间培育前的适温生长期,杂交组平均生长速度明显快于自交组,能相差0.5cm左右,至海上养成前,杂交组平均壳长较自交组长0.8cm左右。
3讨论
3.1实践表明,日本盘鲍同本地皱纹盘鲍只要亲鲍规格适宜、贮养得当,是可以实现同步产卵排精,并可顺利受精孵化,培育出杂交子一代,不论正交或反交均可达到杂交育种的目的。我们根据两者的生物学零度和成熟积温不同,控制促熟的升温幅度和天数,以便其能同步产卵排精。3.2经过2年试验性生产,我们发现杂交组合所产生的后代,尤其是正交组合皱(♀)×日(♂)所产生的子代在抗病力、生长速度、成活率等方面有着明显的优势。自交组由于近亲交配,在种质上体现退化现象。因此通过杂交培育新品种是种质优化复壮的重要途径。实践证明,稚的剥离后30~60天,是死亡高峰期。因为剥离的机械损伤和此时正处于高温期疾病多发期,很多场家鲍的自交后代由于抗病力差,剥离后30~60天,死亡率很高,至第2次剥离筛选成活率甚至低于10%。我们的自交试验也证明了这一点,而杂交组合的成活率高达60%,其抗病优势是显而易见的。在海上养成阶段,杂交组合所育鲍苗在抗病力、生长速度方面明显优于自交组合,相对降低了生产成本,缩短了育苗养成周期。
3.32年的试验证明,用本地皱纹盘鲍同日本盘鲍杂交产生的子一代在性状上明显优于自交鲍苗,但必须每年更新杂交亲鲍,也就是说,杂交优势还不能在子二代身上稳定表现。以杂交手段来进一步提纯复壮是十分复杂的工程,要经过多代自交、回交等遗传学方法,才能获得性状优良稳定的种质,这需要运用分子生物学手段和较长时间进行研究。
一、以杂交方法培育优良品种,或利用杂种优势的工作称为杂交育种。杂交育种是水产生物育种的重要途径之一,已经在水产生物的品种改良和生产中发挥了巨大的作用。将来即使生物技术得已广泛应用,它也仍然是生物育种的基本途径之一。
(一)杂交育种的原理
杂交生物学的特性是能急剧动摇遗传的保守性,使杂种的遗传性富于游动性,更具有可塑性。杂交可以使生物的遗传物质从一个群体(物种、亚种、品种或种群)转移到另一群体,是增加生物变异性的一个重要方法。杂交并不产生新基因,而是利用现有生物资源的基因和性状重新组8合,将分散于不同群体的基因组合在一起,建立合意的基因型和表型。因此,基本而言杂交育种乃是运用遗传的分离规律、自由组合规律连锁互换规律来重建生物的遗传性、创造理想变异体。
杂交可以依据双方的亲缘关系,分为种间杂交和种内杂交。种间杂交包括亚科间和属间杂交,种内杂交又可分为近亲交配、非亲缘交配。近亲繁殖能导致后代纯合性增加,提高遗传稳定性,但是也能使某些有害隐性基因,从杂交状态转变为纯合状态而产生近交衰退。杂交系指种间杂交、种内不同类群的杂交、不同品种以及一切非近亲关系的交配。
一般说来,杂交难以表现出全新的性状,但有可能出现部份新性状,有的还能把双亲的优良性状综合起来,部份或全部地表现出来,以致表现为介于双亲之间的中间性状或杂种优势。鱼类杂种经电泳分析有来自双亲的成份,与缺少双亲某些成份与具有双亲以外的某些成份。
(二)杂交育种一般分为三种阶段
杂交创新阶段:这阶段的任务是用两个或两个以上种群(或物种)杂交创造合意的变异体或杂种优势子代。为此,必须搜集有关资料、制订育梗目标、选择杂交亲鲍、确定杂交方式、正确使用人工杂交技术、观测杂种性状并推出合意变异体。
杂交育种目标和现有水产资源的性状情况而定,杂交虽然可以创造变异,但是这种变异是建立在基因重组和互相作用的基础上不可能无中生有。杂交可以产生比双亲更高的性状值,难以产生双亲所不具有的性状,育种目标不能脱离性状的遗传基础。杂交亲鲍的选择必须有助于合意性状的产生。为此,要做好两项工作,一是选好杂交亲鲍种群,使之具有育种目标所需要全部性状,而且遗传构成(如核型)是彼此协调和相容的。二是选择好杂交亲鲍的个体,使之具有育种目标所需要之较突出性状。鋻于亲鲍种群的个体之间有差异,杂交一定要选用最好的个体。
(三)杂交育种方式
杂交方式是多种且多样化的,可以通过单交进行增殖杂交或经济杂交,也可以对单交种子代进行回交,还可以采用复合杂交等方式来进行。究竟采取何种交配方式,取决于杂种代的表现、可育性、育种目标以及性状的遗传力。若是育种目标性状是由基因的非加性效应造成,就只能采用经济杂交。倘若育种目标性状是由基因的加性效应造成的,出现一定效果并且可育高,那么可以考虑采取增殖杂交或回交的方式。若是育种目标能综合三个以上种群,或物种的优良性状,而且所涉及的单交种子可以采取复合杂交。若是杂交育种的目标性状是质量性状,应该参照性状的遗传规律及其所涉及的基因数目,采取增殖杂交或回交方式。确定杂交方式前,有时要做大量的杂交试验,从中比较配合力。
二、结论
杂交育种的方式很多,其目的在于作为育成新品种的杂交,包括育成杂交、级进杂交、引入杂交、综合杂交等,有些是为杂种一代优势利用的杂交,如经济杂交等等功能。杂交对于鲍鱼的遗传改造与创新品种等方面有积极性的意义,杂交是人类赖以生存获取动物性蛋白质之重要方法,但也可为人类带来不良后果,这些优势种可能独占领域,其基因污染将是未来严重的遗传后果,因此,我们不得不慎重正视科技为人类带来另一负面影响。政府必须评估那些杂交种不得推广,并制订法律来约束严禁任意盲目地杂交品种,因而危害到其他原有在生种之灭绝。
中国水产科学研究所渔业经济研究所,1986, 《水产业技术改造》 ,海洋出版社。
吴宝铃,1999, 《贝类繁殖附着变态生物学》 ,山杽科学技术出版社。
楼允东,1999,《鱼类育种学》 ,中国农业出版社。
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